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和枢消积丸治疗原发性肝细胞癌有效单体筛选与靶点机制研究
作者: 梅宁
单位: 西南医科大学附属中医医院

摘要

背景:和枢消积丸显著延长原发性肝细胞癌(HCC)患者总生存期和无复发生存期。前期质谱已明确和枢消积丸9个主要的入肝入血成分,患者外周血蛋白组学发现9个潜在治疗靶点。本研究旨在探索和枢消积丸治疗HCC的有效成分及分子机制。


采用CCK-8法评估入血入肝候选成分对肝癌细胞增殖的影响。使用PLC/PRF/5、Hep3B及HCC-LM3细胞,分别给予不同浓度的候选单体(1、10、20、50、100 μM)处理,检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC₅₀),筛选具有显著抗增殖活性的有效单体。随后结合前期蛋白质组学结果,采用RT-qPCR初步评价有效单体对相关靶基因的调控作用。首先以20μM作为初筛浓度进行快速筛选,随后对入选单体在剂量依赖条件下进行验证,设置1/2 IC₅₀、IC₅₀及2×IC₅₀三个浓度梯度,以进一步确认有效单体和分子机制。


CCK8筛选显示,白杨素对三种肝癌细胞抑制活性最强,且呈剂量和时间依赖性,72小时IC₅₀分别为27、36、54μM。通过RT-qPCR初筛观察到GSR、S100A8、GSN、COL18A1、APOA1的mRNA表达水平在20μM白杨素处理后出现变化。进一步选取GSR、S100A8、GSN、COL18A1进行剂量依赖性验证。结果显示,白杨素可以显著抑制COL18A1的表达(P<0.05),GSR、S100A8呈双向调控,GSN在各浓度下无显著变化。

白杨素是和枢消积丸抑制HCC的有效成分之一,其作用可能与抑制COL18A1相关。

关键词: 和枢消积丸;肝细胞癌;中药单体;机制研究
来源:第十届中国研究型医院学会肝病专委会学术会议