摘要
运用质谱法描绘原发性干燥综合征(Primary Sjögren’s syndrome,pSS)患者的血清蛋白质和N-糖基化组学图谱。利用血浆免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)的N-糖基化特征鉴别pSS与系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE),并探究血浆IgG唾液酸化水平与pSS疾病活动度和高球蛋白血症发生率之间的关系;为pSS的血清学机制研究提供新的分子证据。
本研究纳入在深圳市人民医院风湿免疫科确诊的pSS患者、SLE患者以及年龄和性别匹配的健康对照各10例。血清样本使用高分辨率液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)进行了蛋白质组和N-糖基化组学分析。采用Spectronaut和MSFragger平台进行了蛋白质和糖蛋白的鉴定和定量,基于GO、KEGG、Reactome、WikiPathways等数据库进行了功能注释、富集和聚类分析,通过STRING数据库构建了蛋白互作网络,并通过酶联免疫吸附实验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)探究了IgG唾液酸化水平与pSS疾病活动度和高球蛋白血症、淋巴瘤发生率的关系。
蛋白质组学共鉴定15430条肽段和2170个蛋白;N-糖基化组学共鉴定1294条完整N-糖肽、279个N-糖基化位点和186个N-糖蛋白。pSS与SLE的血浆N-糖基化图谱区别显著。相对健康对照(上调:66.79%;下调:100.00%)和SLE患者(上调:65.30%),pSS患者血清中差异表达糖蛋白主要为唾液酸化糖蛋白。功能富集和聚类分析表明,差异表达的唾液酸化IgG糖蛋白显著富集于补体激活、凝血途径和炎症相关通路。ELISA显示pSS患者IgG唾液酸化水平与疾病活动度呈负相关,且合并高球蛋白血症的患者IgG唾液酸化水平更高。
本研究首次利用LC-MS/MS系统描绘了pSS患者血清蛋白质组学和N-糖基化组学特征,指出了pSS与SLE患者N-糖基化组学图谱存在显著区别,分析了pSS患者IgG的N-糖基化修饰特征,探究了IgG唾液酸化水平与pSS患者疾病活动度和高球蛋白血症的关系,为深入研究pSS的免疫学机制及开发潜在生物标志物提供了新思路。
