摘要
1. 技术原理
· 核型分析：中期细胞染色体显带（G/Q带），显微镜观察形态、数目。
· FISH：荧光标记探针与特定DNA序列杂交，荧光显微镜定位信号。
· CMA：芯片上的探针与全基因组DNA杂交，通过信号强度计算拷贝数变异（CNV）。
· 全外显子分析：高通量测序捕获外显子区（约1%基因组）并测序，分析点突变、小片段插入缺失。
2. 分辨率
· 核型：5-10 Mb
· FISH：100 kb - 1 Mb
· CMA：50-100 kb
· 全外显子：单碱基级别
3. 检测变异类型
· 核型：非整倍体、大片段缺失/重复（>10 Mb）、平衡易位、倒位、标记染色体。
· FISH：特定位点的缺失、扩增、易位、融合基因。
· CMA：全基因组CNV（包括微缺失/微重复）、杂合性缺失、单亲二体（UPD）。
· 全外显子：单核苷酸变异、小插入缺失（indel，通常<50 bp），可间接提示部分CNV。
4. 无法检测的变异
· 核型：微小CNV、点突变、低比例嵌合体（<10%）。
· FISH：探针范围外的变异、未知位点异常、点突变。
· CMA：平衡易位、倒位、点突变、低比例嵌合体（<10%）。
· 全外显子：深内含子变异、大片段CNV（需专用算法）、启动子/增强子变异、三核苷酸重复扩展。
5. 样本要求与培养
· 核型：活细胞（羊水/外周血等），需培养7-14天。
· FISH：新鲜或固定细胞，无需培养，2-4小时出结果。
· CMA：DNA，无需培养，1-2天。
· 全外显子：DNA，无需培养，2-4天。
6. 嵌合体检测灵敏度
· 核型：≥10%，可通过计数更多细胞提高至5%。
· FISH：可低至1%。
· CMA：约10-20%。
· 全外显子：基于变异等位基因频率，可检出5-10%嵌合。
7. 主要临床应用
· 核型：产前诊断（21/18/13三体）、血液肿瘤（如慢性粒细胞白血病Ph染色体）、复发性流产排查。
· FISH：产前快速非整倍体检测、血液肿瘤融合基因（如PML-RARA）、HER2/neu基因扩增。
· CMA：不明原因智力障碍/发育迟缓、自闭症、多发畸形、产前超声异常但核型正常者。
· 全外显子：罕见遗传病（单基因病）诊断、疑似综合征但CMA阴性、肿瘤体细胞突变检测。
10. 技术优势与局限总结
· 核型：金标准看全基因组结构变异（特别是平衡易位），成本最低；但分辨率粗糙、需培养、依赖人工。
· FISH：快速、靶向精确，可低比例嵌合；仅能探针设计内已知位点。
· CMA：自动、高分辨率全基因组CNV检测，适合微缺失/重复综合征；漏平衡易位和点突变。
· 全外显子：发现新突变、单碱基精度、外显子区覆盖全面；对CNV和结构变异分析较弱，数据解读复杂。
