摘要
本研究以人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cell, hUCMSCs）来源Exos为递送载体，构建一种负载PS吲哚菁绿（indocyanine green, ICG）并经抗FAP-α抗体28H1修饰实现RAFLSs靶向的工程化Exos体系，系统评估其在PDT作用下对RAFLSs生物学功能的调控作用及在胶原诱导关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）大鼠模型中的治疗潜力。
分离获得hUCMSCs-Exos，对hUCMSCs-Exos进行重编程，赋予其输送及靶向功能，通过将光敏剂ICG负载到Exos中，然后在其表面加载FAP-α抗体28H1，得到工程化的外泌体（命名为ExoICG+28H1），除对工程化的Exos进行粒径及形态的表征外，还检测了ExoICG+28H1的包载效率、释放效率、水/胶体稳定性、靶向性及安全性评估。在体外实验中，将RAFLSs与ExoICG+28H1共培养，并使用808 nm近红外激光均匀照射，采用共聚焦激光显微镜观察Exos吞噬情况、靶向性及PDT下ICG荧光变化，此外，检测对RAFLSs细胞活力、增值、迁移及侵袭的影响。在体内，构建RA模型CIA大鼠，将ExoICG+28H1注射到CIA大鼠踝关节中，分3次对大鼠踝关节进行808nm激光照射10min，采用活体荧光成像仪检测大鼠关节腔内药物滞留情况、PDT后ICG及28H1变化情况，评估治疗前后CIA大鼠关节炎指数、关节影像学表现和滑膜病理。
工程化ExoICG+28H1中ICG、28H1的包封率为21%、93.7%，载药率为23.33%、1.68%。与单纯ICG相比，ExoICG+28H1在关节腔内表现出更长的滞留时间。荧光共聚焦显微镜显示，ICG和28H1在RAFLSs中聚集，而在软骨细胞中几乎没有聚集。在激光照射下，ExoICG+28H1中ICG含量逐渐减少，同时RAFLSs细胞存活率随激光照射时间的增加而显著降低。活细胞工作站和Transwell检测结果表明，PDT后RAFLSs增值、迁移和侵袭能力均被抑制（P<0.05）。此外，在CIA大鼠中，工程化ExoICG+28H1联合PDT可有效改善大鼠关节炎症和影像学表现。
工程化Exos为PDT治疗RA提供了一种稳定、可靶向、滞留性强且生物相容性优良的纳米递运平台。负载ICG并修饰抗FAP-α抗体的工程化Exos与PDT具有显著协同效应，可有效诱导RAFLSs死亡并在CIA大鼠模型中展现良好的治疗潜力。同时，这一方法为深入理解Exos载药及PDT在RA中的作用机制提供了新的见解。
