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坏死性凋亡相关基因FASLG调控神经母细胞瘤肿瘤免疫作用机制研究
作者: 林伟鸿
单位: 复旦大学附属儿科医院

摘要

神经母细胞瘤(NB)等儿童实体肿瘤突变负荷低,免疫原性差,肿瘤免疫疗效差。坏死性凋亡可作为一种免疫原性细胞死亡激活肿瘤免疫,发挥肿瘤抑制作用。本文主要探究坏死性凋亡相关基因FASLG作为标志物用于预测NB肿瘤免疫疗效的潜力,以及其调控肿瘤免疫疗效的作用机制。

在bulk RNA-seq水平,依据样本总体FASLG表达水平分为高表达组和低表达组; 绘制生存曲线,分析两组总体生存率差异;使用GSEA分析两组富集基因集差异;使用Cibersort法分析两组间肿瘤免疫细胞浸润差异。在单细胞测序水平,分析NB样本中各类型细胞FASLG表达水平; 依据T细胞亚群FASLG表达水平将样本分为T细胞FASLG高表达组和低表达组,分析两组间肿瘤免疫细胞浸润差异;依据肿瘤细胞亚群FASLG表达水平将样本分为肿瘤细胞FASLG高表达组和低表达组,分析两组间肿瘤免疫细胞浸润差异。构建鼠源NB细胞系N2A Faslg过表达株和对照株,观察两组在体外培养、BALB/c裸鼠和A/J系免疫健全小鼠中生长差异。收集A/J系皮下肿瘤,采用单细胞测序分析两组间肿瘤免疫细胞浸润差异。

在bulk RNA-seq水平,FASLG高表达组总体生存率较好;GSEA显示高表达组主要富集免疫相关基因集;Cibersort分析显示高表达组免疫细胞浸润程度高。在单细胞测序水平,NB样本中T细胞亚群FASLG表达水平高,然而,T细胞亚群FASLG高低表达组样本间肿瘤免疫细胞浸润比例无显著差异,肿瘤细胞亚群FASLG高表达组样本肿瘤免疫细胞浸润比例高。N2A Faslg过表达株在体外培养下与对照组无显著差异,在BALB/c裸鼠皮下生长速度略低于对照组,在A/J系免疫健全小鼠中短暂成瘤后迅速消退,而其对照组正常成瘤。A/J系皮下肿瘤单细胞测序分析显示,N2A Faslg过表达株总体CD8阳性T细胞比例增加,Treg免疫抑制细胞比例减少。

NB样本总体FASLG表达水平高,其总体生存率好,富集免疫相关基因集,免疫细胞浸润程度高,总体FASLG表达水平是有效预测肿瘤免疫疗效的标志物。肿瘤细胞亚群FASLG表达水平高的NB样本免疫细胞浸润程度高。NB细胞过表达Faslg可显著抑制其在免疫健全小鼠中成瘤,并显著提高CD8阳性T细胞浸润水平。

关键词: 神经母细胞瘤;肿瘤免疫;FASLG
来源:中华医学会小儿外科学分会第二十次小儿外科学术年会暨第十四届小儿外科中青年医师学术研讨会