类风湿关节炎（RA）是一种慢性全身性自身免疫疾病。本研究旨在利用网络药理学和基因表达分析，探讨中药复方透骨血竭散（TGXJS）治疗RA的作用机制。

本研究数据来源于公共数据库，涵盖了TGXJS的活性成分、靶点基因以及RA的转录组数据。首先，通过将差异表达基因（DEGs）与药物靶点基因取交集来筛选RA相关靶点。随后，利用蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络、机器学习算法、表达量验证及受试者工作特征（ROC）分析来识别生物标志物，特别是利用列线图（Nomogram）工具评估标志物的诊断效能。此外，还进行了功能富集分析、免疫细胞浸润分析及分子对接研究，最后通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验验证了生物标志物的表达水平。

网络药理学分析显示，从TGXJS中筛选出26种活性成分，涉及700个靶点基因。通过将560个差异表达基因与700个靶点基因进行比对，鉴定出35个RA相关靶点，其中PPP1CA和LCK被确定为关键生物标志物。基于这两个标志物构建的列线图在区分不同样本类型方面表现出良好的诊断性能。功能富集分析表明，这些标志物与MYC靶点V1、氧化磷酸化、mTORC1信号通路、DNA修复及脂肪生成等通路密切相关。相关性分析显示，PPP1CA和LCK的表达与M0型巨噬细胞呈显著负相关，而与静息态NK细胞呈正相关。重要的是，分子对接实验证实了24-亚甲基环阿屯酮与LCK具有良好的结合活性。此外，TGXJS治疗显著上调了PPP1CA和LCK的表达。

本研究预测了透骨血竭散治疗RA的两个关键生物标志物，为RA治疗机制的研究提供了新的方向。