观察雪莲注射液（Saussurea involucrata injection，SII）对骨髓源性DC（Bone marrow derived dendritic cells，BMDC）成熟活化的分子机制

运用LPS体外诱导DC成熟与活化，分为正常组（Control）、LPS（1μg/mL）组、LPS+0.2mg/mL SII组、LPS+1mg/mL SII组、LPS+5mg/mL SII组，并给予天山雪莲注射液干预。在此基础上利用RNAi技术分别沉默DC中的“Trp-IDO1-Kyn 轴”关键酶IDO1以及其下游靶点AhR，分为：DC组、LPS干预组、天山雪莲注射液+LPS干预组、IDO1沉默组、IDO1沉默组+LPS干预组、天山雪莲注射液+IDO1沉默+LPS干预组、AhR沉默组、AhR沉默+LPS干预组、天山雪莲注射液+AhR 沉默+LPS干预组。进一步，应用流式细胞检测、ELISA、Western blot等方法，对比分析沉默前后，天山雪莲注射液对DC成熟活化、NF-κB信号通路、“Trp-IDO1-Kyn轴”的影响。

采用流式细胞术检测各组DC细胞表面CD11c+CD80+CD86+分子的表达水平。与DC组相比，LPS干预组DCs表面分子CD11c+CD80+CD86+分子显著增加；与LPS干预组相比，天山雪莲注射液干预后CD11c+CD80+CD86+分子的表达均显著降低；沉默IDO1和AhR后，天山雪莲注射液失去了这种作用结果（图2.1A，B）。同时，ELISA检测各组细胞上清液中IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12p70炎性细胞因子水平，结果显示，与DC组相比，LPS干预组炎症因子水平显著增加；与LPS干预组比，天山雪莲注射液干预后炎症因子表达均显著降低；沉默IDO1和AhR后，对细胞因子分泌的调控效应不再明显（图2.1 C-J）。在对T细胞活化能力检测中发现，LPS干预对T细胞的活化能力显著增强，IFN-γ、IL-2表达显著增高，天山雪莲注射液干预后对T细胞的活化能力显著降低。沉默IDO1和AhR后，天山雪莲注射液对T细胞活化的抑制作用同样减弱或消失；RT-qPCR和Western blot检测结果表明，与DC组相比，LPS组NF-κB通路关键因子的基因和蛋白水平显著升高，天山雪莲注射液干预后上述关键因子的基因与蛋白表达均显著降低。沉默IDO1和AhR后，天山雪莲注射液对NF-κB通路的抑制作用明显减弱或消失；蛋白质免疫共沉淀结果显示，LPS组AhR与ARNT的结合减少，而天山雪莲注射液干预后AhR与ARNT结合增强；在沉默IDO1或AhR后，天山雪莲注射液促进AhR–ARNT结合的作用不再明显。进一步，RT-qPCR和Western blot检测结果表明，LPS组“Trp-IDO1-Kyn 轴”关键因子的基因和蛋白水平显著降低，天山雪莲注射液干预后相关指标得到上调。沉默IDO1或AhR后，天山雪莲注射液对“Trp–IDO1–Kyn轴”相关指标的上调作用明显减弱或消失。

天山雪莲注射液很可能是通过“Trp-IDO1-Kyn 轴”介导AhR激活并抑制NF-κB信号通路，从而抑制DC的成熟活化，最终发挥改善RA炎症反应的作用。