在体外中性粒细胞模型中验证盐酸米诺环素通过抑制肽基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）进而对中性粒细胞胞外捕网（NETs）的抑制作用并探究其有效浓度。之后，进一步探索盐酸米诺环素通过抑制NETs进而发挥的抗炎、抗骨吸收作用，以及盐酸米诺环素-中性粒细胞模型对牙周致病菌的抗菌效果。

将HL-60细胞诱导为中性粒细胞样细胞（dHL-60），用流式细胞术检测表面抗原CD11b表达比例。用佛波酯（PMA）刺激产生NETs，通过对中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）及DNA进行免疫荧光染色可视化NETs，建立NETs模型。加入含有不同浓度盐酸米诺环素的培养基，通过检测瓜氨酸化组蛋白H3（cit H3）的表达量寻找盐酸米诺环素对PAD4的有效抑制浓度，并通过定量检测NETs标志物MPO-DNA复合体进一步验证对NETs的抑制作用及有效浓度。之后，通过检测胞外IL-1、IL-17、TNF-α分泌量初步探究药物模型的抗炎作用，并用培养上清及RANKL培养RAW 264.7，在1、3、5天通过流式细胞术测定细胞向破骨细胞分化的比例。对于盐酸米诺环素对中性粒细胞抗菌能力的影响，将盐酸米诺环素、dHL-60与牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌或中间普氏菌分别共培养，通过菌落计数测定抗菌效果。

在诱导结束后，98.4%的HL-60表面表达了CD11b抗原，分化为dHL-60。免疫荧光染色显示在PMA的刺激下，NETs生成。对cit H3及MPO-DNA的ELISA表明，盐酸米诺环素通过抑制PAD4进而抑制NETs生成的有效浓度为600μg/mL。在此浓度下，dHL-60分泌的促炎因子显著降低，并且可减慢破骨细胞分化速度。并且，在加入盐酸米诺环素后，菌落计数显著降低，明显少于仅有中性粒细胞与细菌共培养时，表明盐酸米诺环素虽然抑制了NETs生成，但因其自身作为抗生素，使得盐酸米诺环素与中性粒细胞反而表现出更好的抗菌能力。

盐酸米诺环素可在600μg/mL时通过抑制PAD4进而抑制NETs生成，进而发挥抗炎、抗菌及抑制破骨的作用。