本研究旨在深入探究在牙周炎发生发展中衰老牙龈成纤维细胞对巨噬细胞免疫功能的影响，明确隧道纳米管（tunneling nanotubes，TNTs）在介导该功能中的重要作用，并进一步揭示衰老牙龈成纤维细胞与巨噬细胞间TNTs形成、以及其介导线粒体转移影响巨噬细胞免疫功能的机制。

首先，采用Western blot、RT-qPCR 及β-半乳糖染色法，检测炎症牙龈成纤维细胞的衰老水平，并进一步验证其细胞骨架相关通路的激活情况；其次，通过共聚焦显微镜、扫描电镜及活细胞成像，将健康牙龈成纤维细胞、衰老牙龈成纤维细胞分别与巨噬细胞进行共培养，鉴定其形成的TNTs结构，分析TNTs的形成数量及形态学特征；采用Cell Trace、MitoTracker 分别标记牙龈成纤维细胞与巨噬细胞，通过直接、间接共培养验证线粒体转移的方向性；最后，在共培养模型中，借助转录组测序与流式分析技术，检测牙龈成纤维细胞对巨噬细胞炎症表型的影响。

在牙周炎发生发展中，炎症牙龈成纤维细胞存在细胞衰老现象，且Rho/Rho激酶（ROCK）信号通路被激活；与健康牙龈成纤维细胞相比，衰老牙龈成纤维细胞可形成更多TNTs；同时，牙龈成纤维细胞与巨噬细胞之间可通过TNTs发生线粒体转移，进而影响巨噬细胞炎症表型。

衰老牙龈成纤维细胞通过TNTs“劫持”巨噬细胞中的健康线粒体，进而影响巨噬细胞炎症表型，导致牙周组织炎症的进一步发展。