骨关节炎（OA）是一种以进行性关节软骨退变为特征的常见退行性疾病，软骨细胞铁死亡在 OA 发病机制中起关键作用，TNF-α可通过促氧化应激与脂质过氧化加剧该过程。本研究旨在探究 Nesfatin-1 对 TNF-α 诱导的小鼠原代软骨细胞铁死亡的保护作用及潜在分子机制，为OA的靶向治疗提供新的实验依据与候选靶点。

分离 4 周龄C57BL/6小鼠膝关节原代软骨细胞，采用10 ng/mL TNF-α构建软骨细胞铁死亡模型，加入Nesfatin-1（25、50 nM）作为预处理组，加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1、Nrf2抑制剂ML385为对照组。分别检测细胞活力（CCK-8）、细胞毒性（LDH、GGT）、脂质过氧化（MDA、ROS、4-HNE）、谷胱甘肽（GSH）水平及 GPx 活性，测定细胞内Fe²⁺含量；通过 qPCR 和 Western blot 检测内源性NUCB2/Nesfatin-1、铁代谢相关分子（TFR1、FTH）、铁死亡核心调控因子（ACSL4、GPx4、SLC7A11）及细胞外基质成分（Col2a1、ACAN）及Nrf2/HO-1通路相关基因与蛋白表达；通过核分离技术分析Nrf2核转位情况，并用铁螯合剂DFO验证铁积累在铁死亡中的作用。

TNF-α 处理后，软骨细胞内源性 NUCB2/nesfatin-1 表达显著下调。外源性Nesfatin-1 预处理呈剂量依赖性地逆转 TNF-α 诱导的细胞活力下降与细胞毒性。Nesfatin-1 处理显著降低 MDA、ROS、4-HNE 水平，恢复 GPx 活性与 GSH 含量。同时，Nesfatin-1 下调 TFR1 表达、上调 FTH 表达，降低细胞内 Fe²⁺ 浓度，并抑制 ACSL4、上调 GPx4、SLC7A11。其效果与 Fer-1 相当。此外，Nesfatin-1 有效恢复 Col2a1 和 ACAN 的表达，保护软骨细胞外基质完整性。机制上，Nesfatin-1 显著促进 Nrf2 核转位并上调 HO-1 表达，激活Nrf2/HO-1 信号通路；而 Nrf2 抑制剂 ML385 可完全消除 Nesfatin-1 的上述保护的作用。实验同时排除了凋亡与坏死途径的参与。

Nesfatin-1 通过激活 Nrf2/HO-1 信号通路，从抑制氧化应激、调控铁代谢、维持细胞外基质稳态等多维度综合减轻 TNF-α 诱导的软骨细胞铁死亡。本研究首次明确了 Nesfatin-1 在软骨细胞铁死亡中的调控作用及分子机制，提示 Nesfatin-1 可作为骨关节炎治疗的潜在新型候选药物，具有重要的转化医学意义。