摘要
【背景Background】
肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells, LSEC）是改善血管异构的关键细胞，其合成的肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）是促进肝细胞再生的核心分子，但影响LSEC合成HGF的分子机制尚不清楚。扶正化瘀方（Fuzheng Huayu Recipe，FZHY）作为临床实践总结出的抗肝纤维化经验方，具有保护LSEC、促进肝细胞再生的作用，通过探索FZHY对LSEC和肝细胞间的关联机制，有助于为抗肝纤维化的治疗提供新思路，并为中医的“祛瘀生新”治法赋予现代医学的内涵。
【方法Methods】
体内构建CCl4肝纤维化小鼠模型并给予FZHY干预，分别收集肝组织和血清进行检测；生化实验检测ALT和AST水平；HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原纤维沉积；免疫组化检测肌成纤维标志物α-SMA，LSEC分化标志物CD31，肝细胞增殖标记物Ki67；扫描电镜观察LSEC窗孔结构；Western Blot检测NOTCH1、HES1、HGF的蛋白表达水平。体外构建CoCl2诱导HHSEC去分化模型并给予FZHY干预，分别收集细胞和培养上清。免疫荧光共染实验检测CD31和NOTCH1的表达；Western Blot检测各组细胞HES1和HGF的蛋白水平；随后使用HHSEC细胞培养上清孵育THLE-2细胞，EdU实验检测细胞增殖。
【结果Results】
体内生化实验表明FZHY可以降低CCl4小鼠的ALT和AST的水平，HE染色和天狼星红染色实验结果表明FZHY可以改善肝纤维化小鼠肝组织炎症水平和胶原纤维沉积，并显著减少α-SMA的表达水平；扫描电镜结果显示与正常组相比，模型组中的窗孔结构减少甚至消失，而FZHY可以恢复窗孔结构；免疫组化结果亦表明FZHY可以减少CD31的表达水平改善LSEC去分化，并上调Ki67的表达水平促进肝细胞增殖；Western Blot结果提示其分子机制与抑制NOTCH1、HES1蛋白水平、上调HGF蛋白水平有关。体外免疫荧光实验结果显示，FZHY可以减少去分化HHSEC细胞中的CD31和NOTCH1的表达；Western Blot结果显示FZHY可以降低HES1水平、促进HGF的表达，并且Edu实验也表明FZHY组中肝细胞增殖较多。
【结论Conclusions】
FZHY可以调控LSEC中NOTCH1/HES1/HGF信号轴，抑制细胞去分化并促进肝细胞增殖，从而发挥抗肝纤维化的作用。
体内构建CCl4肝纤维化小鼠模型并给予FZHY干预，分别收集肝组织和血清进行检测；生化实验检测ALT和AST水平；HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原纤维沉积；免疫组化检测肌成纤维标志物α-SMA，LSEC分化标志物CD31，肝细胞增殖标记物Ki67；扫描电镜观察LSEC窗孔结构；Western Blot检测NOTCH1、HES1、HGF的蛋白表达水平。体外构建CoCl2诱导HHSEC去分化模型并给予FZHY干预，分别收集细胞和培养上清。免疫荧光共染实验检测CD31和NOTCH1的表达；Western Blot检测各组细胞HES1和HGF的蛋白水平；随后使用HHSEC细胞培养上清孵育THLE-2细胞，EdU实验检测细胞增殖。
体内生化实验表明FZHY可以降低CCl4小鼠的ALT和AST的水平，HE染色和天狼星红染色实验结果表明FZHY可以改善肝纤维化小鼠肝组织炎症水平和胶原纤维沉积，并显著减少α-SMA的表达水平；扫描电镜结果显示与正常组相比，模型组中的窗孔结构减少甚至消失，而FZHY可以恢复窗孔结构；免疫组化结果亦表明FZHY可以减少CD31的表达水平改善LSEC去分化，并上调Ki67的表达水平促进肝细胞增殖；Western Blot结果提示其分子机制与抑制NOTCH1、HES1蛋白水平、上调HGF蛋白水平有关。体外免疫荧光实验结果显示，FZHY可以减少去分化HHSEC细胞中的CD31和NOTCH1的表达；Western Blot结果显示FZHY可以降低HES1水平、促进HGF的表达，并且Edu实验也表明FZHY组中肝细胞增殖较多。
FZHY可以调控LSEC中NOTCH1/HES1/HGF信号轴，抑制细胞去分化并促进肝细胞增殖，从而发挥抗肝纤维化的作用。
