探讨飞龙掌血内酯（Toddalolactone，TOD）通过网络药理学预测、体内外实验验证及多组学联合分析探讨T治疗RA的药效作用、潜在分子机制及其对宿主代谢的调控作用。

第一部分：运用数据库筛选TOD作用靶点及RA疾病靶点，构建PPI网络，并进行GO功能富集分析、KEGG通路富集分析及分子对接研究。以TNF-α诱导的MH7A细胞为研究对象，采用CCK-8法检细胞活力；采用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量；采用Western blot检测PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达变化。

第二部分：构建胶原诱导性关节炎大鼠模型，随机分为正常组、模型组、TOD低剂量组、TOD中剂量组、TOD高剂量组和甲氨蝶呤组。观察各组大鼠体重、关节炎评分和足趾肿胀度；采用ELISA检测血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平；采用HE染色观察踝关节及肝肾组织病理变化；采用番红固绿染色评估软骨破坏程度；采用TRAP染色检测破骨细胞活性。

第三部分：采集正常组、模型组及TOD组大鼠血清，采用LC-MS非靶向代谢组学技术筛选差异代谢物，并进行代谢通路富集分析。

第四部分：采集正常组、模型组及TOD组大鼠膝关节滑膜组织，进行RNA-seq测序，筛选差异表达基因，并开展GO功能分析和KEGG通路富集分析。

第一部分：数据库分析共获得TOD作用靶点100个、RA相关靶点495个，交集靶点29个，进一步筛选出PIK3CA等8个核心靶点。KEGG富集分析显示，PI3K/Akt信号通路是关键通路之一；分子对接显示TOD与JAK2等靶点具有强结合活性。CCK-8结果显示，TOD在5～40 μM范围内作用24 h和48 h后，对MH7A细胞活力无显著影响。ELISA结果显示，TOD可显著降低细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平。Western blot结果显示，TOD可显著逆转TNF-α诱导的MH7A细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达升高。

第二部分：与模型组比较，TOD各剂量组均可降低CIA大鼠关节肿胀度和关节炎评分（P<0.05），且高剂量组疗效优于中、低剂量组（P<0.05）。与模型组比较，TOD可呈剂量依赖性降低大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平（P<0.05）。HE染色结果显示，TOD各剂量组滑膜增生及炎性细胞浸润明显减轻（P<0.05）；番红固绿染色结果显示，TOD可减轻软骨破坏；TRAP染色结果显示，TOD可显著抑制破骨细胞活性（P<0.05）。此外，HE染色结果显示，TOD各剂量组肝、肾组织均未见明显毒性损伤。

第三部分：LC-MS共鉴定出1780种代谢物。模型组与正常组比较，共筛选出143个差异代谢物（P<0.05），其中43个上调、91个下调；TOD组与模型组比较，共筛选出347个差异代谢物（P<0.05），其中118个上调、219个下调。经TOD干预后，共有13个代谢物发生显著回调。

第四部分：转录组学结果显示，与正常组比较，模型组共筛选出292个差异表达基因（P<0.05），其中82个上调、210个下调；与模型组比较，TOD组共筛选出311个差异表达基因（P<0.05），其中65个下调、246个上调。两组差异表达基因交共26个。

TOD可显著改善CIA模型大鼠关节炎症，抑制软骨和骨组织破坏，可能与靶向JAK2、KDR、GSK3β等关键靶点，调控PI3K/Akt等信号通路，改善氨基酸代谢、甘油磷脂代谢及花生四烯酸代谢，并降低TNF-α、IL-6和IL-1β等炎症因子水平有关，从而发挥抗RA作用。