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第28届欧洲血液学年会（EHA）于2023年6月8日-11日在德国法兰克福以线上+线下的形式举行。江苏省人民医院朱华渊教授团队2项关于慢性淋巴细胞白血病（CLL）的研究入选了2023 EHA年会的壁报，医脉通特邀朱华渊教授带领我们对这2项研究进行回顾，以飨读者。

单细胞RNA测序揭示了BTK抑制剂耐药且发生Richter转化的CLL患者的耗竭T细胞的空间异质性

CLL向侵袭性B细胞淋巴瘤的转化（Richter转化）仍是临床面临的挑战，此类患者接受标准治疗后的预后较差。目前，Richter转化的潜在机制尚未被完全揭示，尤其是在接受布鲁顿氏酪氨酸激酶（BTK）抑制剂等新型靶向药物治疗后，发生Richter转化的免疫微环境的异质性未被完全明晰。基于此，研究者采用了单细胞RNA测序，探索了Richter转化且BTK抑制剂耐药CLL患者的耗竭T细胞的空间异质性。

研究方法

研究者对2例Richter转化（P1，P2）和2例加速期CLL（P3，P4）患者的淋巴结和外周血细胞进行了单细胞RNA测序，并进行了相应的生物信息学分析。P1和P2接受了BTK抑制剂治疗，P1接受伊布替尼治疗3个月，P2接受泽布替尼治疗19个月，随后均出现了Richter转化。P3初诊时被确诊为加速期CLL，P4接受泽布替尼治疗54个月后进展为加速期CLL。

研究结果

4例患者外周血和淋巴结的T细胞亚群分布的空间异质性较大，尤其是BTK抑制剂治疗后进展转化为弥漫性大B细胞淋巴瘤的患者。4例患者外周血单细胞RNA测序结果显示，T细胞分布相似，两个主要簇为CD4⁺幼稚T细胞和CD8⁺效应记忆T细胞。2例RT患者的淋巴结单细胞RNA测序结果显示，CD8⁺耗竭T细胞显著富集，而CD4⁺幼稚T细胞在未接受治疗的加速期CLL患者的淋巴结中占主导地位。4个CD8⁺耗竭T细胞簇表现出显著的异质特征，外周血CD8⁺耗竭T细胞主要富集于簇1，其有着最高的细胞毒性和最低的耗竭特征；淋巴结CD8⁺耗竭T细胞主要富集于簇3，其有着最高的耗竭特征和最低的细胞毒性；簇2在外周血中分布较少，主要分布在淋巴结中，显示出最高的循环和增殖特征。CD8⁺耗竭T细胞的轨迹分析表明，簇1是耗竭细胞的前体阶段，簇3是耗竭细胞的终末阶段。细胞间相互作用的构建结果表明，与未接受治疗的CLL细胞相比，高增殖转化的B细胞与T细胞亚群，尤其是CD8⁺效应和耗竭T细胞，存在显著的相互作用。T细胞亚群与肿瘤细胞间的受体-配体相互作用的分析表明，BTK抑制剂耐药的肿瘤细胞与CD8⁺效应和耗竭T细胞间存在CD70-CD27和LGALS9（galectin-9）-HAVCR2（TIM3）激活，这是Richter转化免疫逃逸的潜在机制。

研究结论

BTK抑制剂耐药，Richter转化和加速期CLL患者的外周血和淋巴结细胞的单细胞RNA测序分析表明，此类患者的T细胞亚群分布存在很大的异质性，Richter转化患者的淋巴结富含CD8⁺终末阶段的耗竭T细胞。此外，高增殖转化的B细胞与CD8⁺效应和耗竭T细胞间存在显著的相互作用，并通过激活CD70-CD27和LGALS9-HAVCR2导致T细胞耗竭。

多组学研究揭示泽布替尼耐药的CLL患者的克隆演化特征

第一代BTK抑制剂伊布替尼的耐药机制已在CLL患者中得到了广泛研究。但第二代BTK抑制剂（如泽布替尼）的耐药机制在很大程度上仍未被揭示。基于此，研究者整合多组学数据探索了泽布替尼耐药CLL患者的克隆演化特征。

研究方法

研究回顾性地纳入了8例泽布替尼耐药的CLL患者，在一系列样本中，进行了针对BTK和PLCG2基因突变的深度靶向下一代测序（NGS）和微滴式数字PCR（ddPCR）。3例淋巴结进行性肿大、泽布替尼耐药的CLL患者接受了匹配的外周血和淋巴结的单细胞RNA测序（scRNA-seq）。

研究结果

患者从接受泽布替尼治疗至进展的中位时间为30.5个月，其中2例患者13个月治疗后出现了Richter转化。NGS结果显示，在8例患者中，5例患者检测到BTK Cys481突变，其中1例患者还额外携带BTK Leu528Trp低频突变，1例患者检测到PLCG2突变，但不伴BTK Cys481突变。3例通过NGS无法检测到BTK突变的患者，接受了ddPCR，其中1例患者检测出BTK Cys481Ser突变，表明存在空间异质性。克隆进化模型表明，TP53、EGR2、NOTCH1和SF3B1是泽布替尼耐药期间的主要驱动克隆。

scRNA-seq分析显示，Richter转化患者的MCL-1表达显著升高，而进展期CLL患者的BCL-2表达显著更高（p<0.0001），表明BCL-2蛋白家族的依赖性在不同疾病之间存在转变。

研究结论

该研究表明，BTK Cys481和Leu528是导致泽布替尼耐药的两个主要基因突变。BCL-2抗凋亡蛋白家族的表达转变表明，MCL-1表达升高可能影响Richter转化患者在泽布替尼耐药后对维奈克拉的敏感性。

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朱华渊教授

中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会第二届青年委员会副主任委员

CSCO抗白血病联盟及抗淋巴瘤联盟青年委员

江苏省研究型医院学会淋巴瘤专业委员会秘书长

江苏省医师协会血液分会委员

江苏省医学会血液分会淋巴瘤学组成员

江苏省第16批“六大高峰人才”

新加坡国立大学杨璐琳医学院暨新加坡癌症科学研究所访问学者

美国克利夫兰医学中心博士后

主持国家自然科学基金两项