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RNA甲基化是一种关键的表观遗传修饰方式，它影响着RNA生物学的多个方面，包括核转运、稳定性以及特定RNA分子的翻译效率。维持RNA甲基化的最佳平衡对于细胞生存、增殖和迁移等基本细胞活动至关重要，也与多种病理生理状况相关联，如衰老、肿瘤生成和血管生成，这些过程对于理解一系列眼部疾病具有重要意义。不同的RNA甲基化模式在多种严重影响视力健康的眼科疾病中发挥重要作用。本综述深入剖析了RNA甲基化对常见及致盲性眼部疾病的影响，探讨了其在氧化应激和血管生成等关键病理生理机制中的精细作用，为RNA甲基化在眼科治疗领域的应用提供参考。

1.RNA甲基化与相应检测方法

N6-甲基腺嘌呤（m⁶A）、N1-甲基腺嘌呤（m¹A）、5-甲基胞嘧啶（m⁵C）和7-甲基鸟嘌呤（m⁷G）为常见的RNA甲基化形式，可发生在mRNA、tRNA、rRNA、microRNA、环状RNA、长链非编码RNA、核小RNA上。目前，RNA甲基化检测策略可分为三大类：全局检测、转录组检测、位点特异性检测。

全局检测旨在探究总甲基化水平变化与特定表型或状态间的联系，常用技术包括基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的比色法、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）、薄层色谱（TLC）及点杂交。位点特异性检测则基于预存数据验证甲基化并精确定位，如SCARLET法结合TLC和位点特异性RNase H消化，可单核苷酸分辨率探测m⁶A。基于半定量qPCR的方法利用修饰核苷酸阻碍逆转录酶延伸的特性检测m⁶A。SELECT法能在单核苷酸水平检测，适用于m⁶A、m¹A及2'-O-甲基化（Nm）。转录组检测类似基因组学中的下一代测序（NGS），如MeRIP-seq结合MeDIP、RIP及RNA-seq提供转录组甲基化位点信息，但分辨率较低。其他方法如m⁶A-seq、miCLIP及eTAM-seq等也能提供高分辨率甲基化信息。

2.RNA甲基化与各类眼病

甲基化稳态影响多种常见眼部疾病，如年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、白内障、青光眼、葡萄膜炎、视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤、甲状腺相关眼病和近视。

2.1老年性黄斑变性

年龄相关性黄斑变性是55岁以上人群致盲的主要原因，分为干性AMD（萎缩性AMD）和湿性AMD（新生血管性AMD）。近年来，表观遗传学在AMD中的作用受到关注。DNA甲基化和组蛋白甲基化在AMD中发挥重要作用，如GSTM1和GSTM5基因的高甲基化与AMD易感性相关。RNA甲基化（如m⁶A）也在AMD中具有潜在作用，例如m⁶A修饰的环状RNA（circRNA）可通过调节氧化应激和代谢稳态保护视网膜色素上皮细胞。此外，长链非编码RNA（如IPW）在AMD中也表现出异常表达，影响视网膜功能。Aβ（淀粉样蛋白）是玻璃膜疣的主要成分之一，与AMD的发病相关，FTO基因在Aβ诱导的AMD模型中表现出保护作用。m²G（N2-甲基鸟苷）及其甲基化酶THUMPD2与AMD的剪接体功能相关，可能通过影响剪接过程参与AMD的发病机制。

2.2白内障

白内障是低收入和中等收入国家可逆性失明的主要原因，其发病机制与氧化应激密切相关。流行病学统计发现，白内障的发生与RNA甲基化及其相关酶有关。在白内障的发病机制中，晶状体上皮细胞（LECs）起着关键作用。研究表明， METTL3通过调控circRNA has_circ_0007905的m⁶A修饰，抑制LECs的增殖并促进其凋亡。此外，m⁶A修饰的长链非编码RNA（lncRNA）也与LECs的铁死亡相关。在糖尿病性白内障中，METTL3的敲低可抑制LECs的凋亡并促进其增殖。这些研究结果表明，m⁶A甲基化在不同类型白内障的发病机制中均发挥重要作用，但其对mRNA的具体影响仍需进一步研究。

2.3糖尿病性视网膜病变

糖尿病视网膜病变（DR）是工作年龄人群的主要致盲原因。其发病机制复杂，涉及多种风险因素和遗传背景，在DR的发病过程中，视网膜神经血管单元（NVU）的破坏是关键因素之一。高血糖条件下，内皮细胞（ECs）通过内皮-间充质转化（EndoMT）转化为肌成纤维细胞，导致血管内皮细胞黏附蛋白表达下降，而肌成纤维细胞标志物表达上升。研究发现，METTL3在高血糖条件下表达下降，而其催化的m⁶A修饰可稳定lncRNA SNHG7，进而抑制EndoMT过程。此外，FTO在DR中也发挥重要作用，其在糖尿病视网膜纤维血管膜中表达上调，抑制FTO可减轻糖尿病诱导的视网膜血管渗漏。FTO还可通过调节细胞周期和尖端细胞形成促进DR中的血管生成。在视网膜色素上皮（RPE）细胞中，高血糖诱导的凋亡和焦亡可通过METTL3/miR-25-3p/PTEN/Akt信号通路调节。此外，HAGLR通过IGF2BP2介导的m⁶A修饰作为miR-106b-5p的海绵，激活PTEN/Akt信号通路，导致RPE细胞焦亡。这些研究表明，m⁶A修饰在DR的发病机制中具有重要作用，可能成为未来治疗DR的新靶点。

2.4青光眼

青光眼是一种以视网膜神经节细胞（RGCs）进行性丢失和视神经损伤为特征的疾病，常伴有眼压升高，是全球不可逆视力损害的首要原因。表观遗传学改变（如m⁶A修饰）在青光眼的发病机制中具有重要作用。在假性剥脱性青光眼（PXG）中，研究发现患者房水中的m⁶A水平显著升高，相关甲基化酶（如METTL3、YTHDC2）表达上调。此外，在实验性急性青光眼小鼠模型中，敲除YTHDF2可保护RGCs免受树突变性，维持更高的树突复杂性。在青光眼治疗手术后，m⁶A修饰还与术后瘢痕形成相关，抑制METTL3可减少细胞增殖和ECM沉积。

2.5葡萄膜炎

葡萄膜炎是一种以眼内炎症为特征的疾病。在发达国家，葡萄膜炎是致盲的第五或第六大原因，影响所有年龄组。葡萄膜炎的发病机制复杂，主要与自身免疫、特定HLA抗原和炎症介质相关。MHC基因是葡萄膜炎的遗传风险因素，其中MHC I类和II类特定等位基因分别与不同类型的葡萄膜炎相关。近年来，RNA甲基化在葡萄膜炎中的作用受到关注。研究发现，视网膜小胶质细胞在自身免疫性葡萄膜炎中发挥关键作用，其M1型极化率增加，且YTHDC1和ALKBH5表达下调。YTHDC1通过靶向SIRT1 mRNA抑制小胶质细胞的M1型极化，起到保护作用。FTO在葡萄膜炎小鼠模型的视网膜小胶质细胞中表达下调，通过GPC4/TLR4/NF-κB信号轴增强炎症反应。此外，树突状细胞（DCs）与Th17细胞的相互作用也受到m⁶A修饰的调控。RPE细胞中FTO表达下调，其靶基因ATF4在FTO敲低后表达降低，可能通过激活p-STAT3通路导致紧密连接丢失。这些研究表明，RNA甲基化修饰在葡萄膜炎的发病机制中具有重要作用，可能成为未来治疗葡萄膜炎的潜在靶点。

2.6葡萄膜黑色素瘤

葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤，起源于葡萄膜黑色素细胞，主要影响脉络膜、睫状体或虹膜，多见于50至70岁人群。RNA甲基化是UM中最受关注的表观遗传修饰之一。研究表明，UM患者中m⁶A整体水平降低，METTL3表达下调而ALKBH5表达上调，提示预后不良。METTL3沉默可显著增强UM细胞的克隆形成和迁移能力，其下游靶基因HINT2的表达受m⁶A修饰调控，过表达HINT2可抑制UM细胞生长和迁移。此外，BACE2和TMEM38B也与UM的发生发展相关，构成m⁶A/BACE2/TMEM38B轴。另有研究者发现UM细胞系和临床样本中m⁶A和METTL3表达显著上调，c-Met是其直接靶基因。此外，m⁵C修饰也与UM相关，NSUN2介导的m⁵C修饰通过靶向CTNNB1促进UM进展。

2.7视网膜母细胞瘤

视网膜母细胞瘤（RB）是儿童中最常见的原发性眼内恶性肿瘤。近年来，RNA甲基化在RB中的作用受到关注。研究发现，METTL3在RB样本中高表达，其沉默可抑制细胞增殖、迁移和侵袭，而过表达则促进RB进展。METTL3沉默还影响PI3K/AKT/mTOR信号通路的磷酸化水平，降低通路活性。FTO在RB细胞中也高表达，其敲低抑制细胞生长、侵袭和上皮-间充质转化（EMT），并促进细胞周期阻滞。FTO通过影响E2F3的m⁶A修饰促进RB进展。此外，m⁵C修饰也与RB的发生发展相关。RB样本中m⁵C水平显著上调，NSUN2表达增加。NSUN2沉默可降低m⁵C水平，抑制细胞增殖和锚定非依赖性生长。多组学分析显示，差异表达基因富集于PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路及代谢通路。NSUN2的下游靶基因PFAS与m⁵C阅读蛋白ALYREF显著互作，揭示了NSUN2/PFAS/ALYREF调控轴在RB发生和进展中的作用。

2.8甲状腺相关眼病

甲状腺眼病（TED）是一种可能损害视力的疾病，通常发生在甲状腺功能亢进（Graves病）患者中。表观遗传修饰（如非编码RNA）在TED发病机制中发挥重要作用。研究发现，TED患者样本中m⁶A水平显著高于对照组，相关酶（如WTAP、ALKBH5等）表达上调。这些变化主要通过调节免疫和炎症通路影响TED进程。基于生物信息学分析，研究者构建了包含DNA甲基化、RNA甲基化和非编码RNA的表观遗传网络，揭示了可能与TED相关的基因，但缺乏实验验证。在自身免疫性甲状腺疾病中，m⁶A修饰的具体调控机制研究取得了进展。例如，在桥本甲状腺炎（HT）患者的甲状腺滤泡上皮细胞中，m⁶A阅读蛋白HNRNPC通过上调ATF4翻译激活内质网应激信号，进而促进HT进展。在Graves病患者甲状腺组织中，METTL3表达下调，而细胞因子信号抑制因子（SOCS）家族成员表达上调，METTL3敲低可进一步增加SOCS表达。

2.9近视

近视是全球最常见的眼科疾病之一，其发生受环境和遗传因素及其相互作用的影响。全基因组关联研究（GWAS）发现多个与近视相关的基因变异，这些基因主要参与眼部发育，但遗传因素无法完全解释近视的快速增加。表观遗传机制可能连接环境因素与基因改变。一项研究对18例近视患者和18例对照组进行甲基化分析，发现1541个高甲基化CpG位点及异常信号通路，但缺乏甲基化基因的生物学功能信息。在高度近视和白内障患者的晶状体前囊中，研究者发现了m⁶A甲基化水平下调，ALKBH5和FTO表达降低，差异甲基化基因富集于细胞外基质形成通路。在缺氧诱导的人类巩膜成纤维细胞（HSFs）中，METTL3表达下调，而APOA1和FOXM1表达上调。研究表明，FOXM1通过抑制METTL3和YTHDF2稳定并增强APOA1表达，从而抑制巩膜过度生长。此外，在脉络膜血管病变中，METTL3也被发现与近视相关。

3.RNA甲基化与氧化应激和血管生成

氧化应激和血管生成是眼部疾病中两个关键的病理过程。研究表明，RNA甲基化在这两个过程中发挥着重要作用。氧化应激由ROS引起，可导致氧化损伤，如脂质过氧化、DNA损伤、自噬和凋亡等。在眼部疾病中，氧化应激可攻击血管内皮细胞并导致血管老化，进而引发一系列视网膜血管疾病，如糖尿病视网膜病变（DR）和AMD等。同时，高ROS水平也被认为是癌症细胞中的一个特征，可促进DNA突变和肿瘤发展。血管生成是多种严重眼部疾病导致不可逆失明的关键因素之一。在AMD、DR和增殖性玻璃体视网膜病变等疾病中，CNV是视力丧失的主要原因。此外，血管生成也是肿瘤转移的基础，为肿瘤细胞侵袭提供物质支持。研究表明，RNA甲基化相关蛋白可增强促血管生成因子或途径的表达水平，如VEGF-A和AKT/mTOR途径等。在眼部肿瘤血管生成中，FTO和METTL3等RNA甲基化酶也发挥着重要作用。

4.RNA甲基化的治疗转化潜力

随着对RNA甲基化在眼部疾病中作用机制的深入研究，未来的研究将更加注重于开发针对RNA甲基化的治疗方法。例如，通过抑制或促进特定的RNA甲基化酶或结合蛋白来调节RNA甲基化水平，从而改善眼部疾病的病理过程。此外，未来的研究还将关注于RNA甲基化与其他生物过程的相互作用，如免疫反应、细胞增殖和分化等，以更全面地理解RNA甲基化在眼部疾病中的作用机制。

总之，RNA甲基化作为一种重要的转录后修饰方式，在眼部疾病中发挥着多种作用。通过深入研究RNA甲基化的检测技术、作用机制以及与其他生物过程的相互作用，我们可以为眼部疾病的治疗提供新的思路和方法。随着科学技术的不断进步和研究的深入，相信未来会有更多的针对RNA甲基化的治疗方法被开发出来，为眼部疾病患者带来更好的治疗效果和生活质量。

本文由上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科唐婕灵博士、周传棣医师、叶福相医师担任第一作者，范先群院士、柴佩韦医师、陆琳娜医师担任通讯作者。