目的：整合靶向NGS测序、ddPCR BTK C481检测及单细胞转录组测序解析CLL泽布替尼耐药的克隆演变模式及耐药克隆特征。

方法：回顾性分析了本中心8例既往经泽布替尼治疗后进展CLL患者的临床及分子生物学信息。

结果：

1.  本中心8例既往经泽布替尼治疗后进展的CLL中，患者接受泽布替尼治疗后中位进展时间为30.5个月，其中2例Richter转化（RS）患者均在接受泽布替尼治疗后13个月内进展。其中5例患者表现为以淋巴结增大为主要进展形式，PET-CT检查对于代谢摄取最高位置进行淋巴结穿刺或活检后，其中2例患者病理诊断为RS，2例患者为加速期CLL（aCLL），1例为CLL进展。

2.  对于8例患者进展时外周血、骨髓或淋巴结组织进行靶向NGS检测发现，其中5例患者检出BTK C481突变（其中1例患者检出BTK C481及BTK L528突变），1例患者检出PLCG2突变。对于NGS未检出BTK突变患者，ddPCR检出1例BTK C481S突变，提示CLL泽布替尼耐药克隆存在空间异质性分布，对以淋巴结进展为表现形式的泽布替尼耐药患者ddPCR检测血浆游离DNA可以更好的反应肿瘤全身负荷。

3.  对于其中6例患者进行序贯动态样本靶向NGS检测，推测主要克隆耐药前后的克隆演变关系：TP53、EGR2、NOTCH1、SF3B1等突变仍然为CLL耐药进展的主要驱动克隆；BTK C481突变克隆通常表现为其它高危克隆的继发演化，在泽布替尼治疗选择压力下进行克隆扩张与克隆抢夺。

4.  3例单细胞转录组测序患者淋巴结进展病理分别表现为CLL进展，aCLL，RS。其中RS高增殖细胞比例显著高于CLL进展及aCLL患者。RS肿瘤细胞DNA修复、细胞周期检查点通路显著活化，B细胞受体通路显著失活。对于BCL-2家族抗凋亡分子表达分析，RS主要表现为MCL-1及BFL-1高表达，而CLL进展主要表现为BCL-2高表达，提示RS可能依赖于MCL-1及BFL-1抗凋亡分子介导维奈克拉的耐药。

结论：本研究整合多组学解析CLL泽布替尼耐药的克隆演变模式及耐药克隆特征。单细胞转录组测序提示泽布替尼进展RS患者MCL-1、BFL-1高表达，进展CLL患者BCL-2高表达，提示RS可能通过MCL-1、BFL-1介导对维奈克拉不敏感。